【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：DNA/RNA病毒唾液血清樣本核酸提取試劑盒（吸附柱法）

英文名稱：Saliva DNA/RNA Extraction Kit （Adsorption column method）

【包裝規(guī)格】50份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于從唾液、血清樣本中高效提取基因組DNA/RNA，專門用于唾液、血清等樣本的核酸提取、富集、純化等步驟。本試劑盒提取的DNA/RNA可以用于Real-time PCR、測(cè)序等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

【檢驗(yàn)原理】

試劑盒采用獨(dú)特作用的裂解液和緩沖液系統(tǒng)，配合高效吸附DNA/RNA的吸附膜，在一定條件下對(duì)DNA/RNA具有極強(qiáng)的吸附富集能力，當(dāng)條件改變時(shí)又可以可逆地釋放DNA/RNA，從而達(dá)到快速分離純化DNA/RNA、并最大限度地去除蛋白質(zhì)、鹽等雜質(zhì)的目的，從而保證提取核酸的純度。

【試劑組成】

【儲(chǔ)存條件及有效期】

所有組分除蛋白酶K外，均可室溫保存，保存得當(dāng)可穩(wěn)定使用12個(gè)月。

【自備材料】

水浴鍋或金屬浴、渦旋振蕩儀、離心機(jī)、1.5ml、2ml無(wú)菌離心管等試劑盒內(nèi)沒(méi)有提供的設(shè)備和耗材。

 【樣本處理】

將新鮮采集的豬口腔唾液樣本加入到含有等量唾液保護(hù)液的采集瓶中待檢。若唾液樣本含有明顯雜質(zhì)，可先吸取1ml含唾液保護(hù)液的唾液樣本至1.5ml離心管，然后離心機(jī)5000-8000rpm離心1分鐘左右，取上層液體進(jìn)行下一步核酸提取；如是血液樣本也可像唾液一樣，先吸取1ml含唾液保護(hù)液的唾液樣本至1.5ml離心管，然后離心機(jī)5000-8000rpm離心1分鐘左右，取上層血清進(jìn)行下一步核酸提取。

【核酸提取】

1.樣本裂解：取上述待檢樣本上清500ul至2ml干凈的離心管中，然后加入500μL裂解液和50μL蛋白酶K溶液，渦旋混勻后置于58℃水浴鍋中溫浴20min，每隔5min搖晃混勻一次，裂解完畢后低速瞬時(shí)離心將管內(nèi)液體集中至管底。

2.核酸結(jié)合：向上述離心管中加入500μL無(wú)水乙醇，上下顛倒混勻，轉(zhuǎn)移全部液體至吸附柱上：先吸取750ul液體至吸附柱，10000rpm 離心1 min，棄濾液。再將剩余液體約800ul全部轉(zhuǎn)移到吸附柱中，10000rpm 離心1 min，棄濾液。

3.淸洗

1)向吸附柱中加入600μL洗液1，10000rpm 離心1 min，棄濾液；

2)向吸附柱中加入600μL洗液2，10000rpm 離心1 min，棄濾液；

4.除醇：將吸附柱放入收集管中，10000rpm離心2min，棄收集管。

5.核酸洗脫

將吸附柱放入新的1.5mL離心管中。向吸附柱的濾膜中加入50 μL洗脫液，室溫靜置1min，10000rpm離心1min，棄吸附柱，收集DNA/RNA（可以選擇提前預(yù)熱洗脫液至65℃，直接洗脫，提高洗脫效率）。

【注意事項(xiàng)】

1. 本試劑盒中的蛋白酶K需置于-20℃中保存，其余組分均可存放于室溫；

2. 本試劑盒提供的無(wú)水乙醇專用于核酸提取和稀釋洗液1和洗液2；

3. 第一次使用新試劑盒需按照瓶身標(biāo)簽向洗液1和洗液2中加入無(wú)水乙醇，稀釋備用；

4. 建議使用新鮮唾液樣本進(jìn)行提取，樣本延時(shí)檢測(cè)或反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致核酸提取量明顯降低；

5. 請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書，并嚴(yán)格按照操作步驟完成操作。

【參考文獻(xiàn)】

1.Yung, H. (2010) Rapid and direct DNA extraction from saliva for personalized medicine.

2.Jaroslava Durdiaková（2012）Comparison of different collection procedures and two methods for DNA isolation from saliva.

  ※僅供科研使用