【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：DNA/RNA病毒環(huán)境樣本核酸提取試劑盒

英文名稱：DNA/RNA virus nucleic acid extraction kit for environmental samples

【包裝規(guī)格】16T/板×2板  ；32T/盒（預(yù)封裝）

【預(yù)期用途】

本試劑盒是專門從養(yǎng)殖環(huán)境、運(yùn)輸車輛、養(yǎng)殖人員、屠宰場(chǎng)等環(huán)境中提取DNA而設(shè)計(jì)的。試劑盒采用磁珠法純化技術(shù)，并結(jié)合獨(dú)創(chuàng)的腐殖酸吸附劑技術(shù)，適合于從各種養(yǎng)殖環(huán)境拭子、土壤（豬場(chǎng)附近3公里內(nèi)）、豬的糞便、豬尿液、豬唾液以及運(yùn)送飼料、生豬的車輛表面等進(jìn)行非洲豬瘟病毒的篩查。目前廣泛應(yīng)用的例子：如豬場(chǎng)內(nèi)的土壤，豬的糞便，豬的唾液，養(yǎng)殖飼料中；試劑盒能夠從此類樣品中提取高產(chǎn)量高純度的總DNA 。

【實(shí)驗(yàn)原理】

試劑盒是采用高結(jié)合力的納米磁珠為基質(zhì)。磁珠在高濃度離子化劑（如鹽酸胍或異硫氰酸胍）條件下，可通過(guò)氫鍵和靜電等物理因素吸附核酸而形成磁珠核酸復(fù)合物，而蛋白質(zhì)或其它雜質(zhì)不被吸附而去除。吸附了核酸的磁珠經(jīng)洗滌去除蛋白質(zhì)和鹽，最后可以用低鹽緩沖液（如Buffer TE）或水，洗脫出納米磁珠上吸附的核酸。得到的核酸純度高，可直接用于各種下游實(shí)驗(yàn)。此外，S3-Cleanup Buffer溶液是我們獨(dú)創(chuàng)的腐殖酸吸附劑，該吸附劑可選擇性吸附DNA樣品中的腐殖酸等抑制因子，提高DNA純度。

【主要組成成分】

【儲(chǔ)存條件及有效期】

室溫保存，保存得當(dāng)可穩(wěn)定使用12個(gè)月。

【注意事項(xiàng)】

1、S2-Lysis Enhancer 使用前請(qǐng)先將其60℃孵育至透明溶解狀態(tài)，由于液體粘稠，移取液體時(shí)，慢吸快放，確保移取液體用量。

2、不同批次、不同組分試劑不能混用。

【核酸提取】

1.樣品處理

1.1 糞便、污泥、養(yǎng)殖飼料

取<0.25 g此類樣本加入Dry beads Tube中，加入900 μl S1-Lysis Enhancer渦旋徹底、混勻。

（此步驟中若飼料、污泥吸水過(guò)多，可以適當(dāng)曾加S1-Lysis Enhancer 的用量。）

1.2 擦拭環(huán)境的抹布、拭子

取少量擦拭環(huán)境的抹布或拭子到15ml 或50ml離心管中，加入1 ml PBS 緩沖溶液浸泡后，用鑷子擠壓抹布或拭子，取250 μl液體至Dry beads Tube中， 加入900 μl S1-Lysis Enhancer渦旋徹底、混勻。

1.3 含豬尿液、養(yǎng)殖用水

使用負(fù)壓設(shè)備，配合抽濾裝置抽濾50ml~200mL的養(yǎng)殖用水（推薦使用0.22 μm的微孔過(guò)濾器配合注射器進(jìn)行過(guò)濾50ml的養(yǎng)殖用水），將微孔過(guò)濾器中的濾膜取出，用剪刀剪碎放入Dry beads Tube中， 加入900 μl S1-Lysis Enhancer渦旋徹底、混勻。

2.加入100μl S2-Lysis Enhancer 溶液至樣品中，65 ℃孵育10 min。

3.劇烈渦旋震蕩10min。

（此步驟可選用研磨儀，頻率：6.5 m/sec ，處理時(shí)間：30S，10個(gè)循環(huán)）

4. 12000 rpm離心5 min，轉(zhuǎn)移上清600μl到新的1.5ml的離心管中。

（注意：離心后上清表面可能出現(xiàn)一層雜質(zhì)，避免吸取這些雜質(zhì)，因?yàn)檫@些雜質(zhì)會(huì)影響下游的擴(kuò)增）

5. 加入400 μl S3-Cleanup Buffer，立即徹底混勻。

6. 12000rpm離心2min，轉(zhuǎn)移全部上清液（約600μl）到 預(yù)分裝板的孔(1\2)、(7\8)中。打開(kāi)核酸自動(dòng)提取儀，選擇編輯程序并命名“environmental samples”，按照下表進(jìn)行編輯。

備注：因?yàn)?6孔板孔內(nèi)最大體積2.2ml，液體多余1ml會(huì)溢液，可將600μl的液體分成兩個(gè)300μl分別加入孔（1、2）或（7、8）中，孔1、2為一個(gè)樣本，孔7、8為一個(gè)樣本。

7. 插入磁棒套，運(yùn)行編輯好的程序，25min左右程序結(jié)束，轉(zhuǎn)移洗脫孔6、12中的DNA至新的離心管-20℃保存或直接進(jìn)入q-PCR 檢測(cè)。

【檢驗(yàn)結(jié)果的判定】

DNA純度：OD260/OD280≈1.7~2.0 (>2.0，表明有RNA污染；<1.7，表明有蛋白質(zhì)、酚等污染）

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1. 本產(chǎn)品批內(nèi)、批間差異＜5%。

2. 利用儀器提取時(shí)，可同時(shí)提取1-32個(gè)樣本，結(jié)果穩(wěn)定且重復(fù)性好。

【參考文獻(xiàn)】

1. Boom, R., C.J.A. Sol, M.M.M. Salimans, C.L. Jansen, P.M.E.W. Dillen, and J. van der Noordaa. 1990. Rapid and simple method for purification of nucleic acids. J. Clin. Microbiol. 28:495–503.